セルファインフェニルEX

セルファインフェニルEX
抗体凝集体のフロースルー精製に

セルファインフェニルEXは、独自のリガンド修飾技術によって抗体医薬の凝集体を効率よく除去することができるクロマトグラフィー充填剤です。抗体の凝集体は選択的に吸着させ、単量体はそのままフロースルー画分に回収されます。このように不純物を選択的に吸着させるフロースルー精製に使用することができます。

仕様
グレード	セルファインフェニルEX	セルファインMAX フェニル	セルファインMAX フェニル LS
基材	架橋セルロース	高架橋セルロース	高架橋セルロース
粒径	ca. 40～130 μm
官能基 (リガンド)	フェニル基
BSA 吸着容量 (mg/ml)	≧13	≧14	≧6
BSA 回収率 (%)	> 30	> 40	> 90
操作圧力	< 0.2 MPa	> 0.3 MPa	> 0.3 MPa
pH 安定性	pH 2 ~ 13
包装形態	20％エタノールに懸濁

構造図Partial structure

セルファインフェニルEX

官能基 (フェニル基)

モデルタンパク質を用いた分離特性Model Protein Separation

疎水相互作用クロマトグラフィーは用途によって最適なリガンド量、すなわち疎水性の強さが異なります。下図はセルファインフェニルEX、セルファインMAXフェニルのモデルタンパク質の分離挙動を示しています。この結果からタンパク質の吸着の強さはセルファインフェニルEX > セルファインMAXフェニルであることが判ります。すなわち疎水性の強さもセルファインフェニルEX > セルファインMAXフェニルとなります。

カラム: 6.6 mm ID x 50 mm L
バッファー A: 10 mMリン酸バッファー(pH 7) + 1.5 M硫酸アンモニウム
バッファー B: 10 mMリン酸バッファー (pH 7)
タンパク質: リボヌクレアーゼA, α-キモトリプシノーゲンA, リゾチーム

抗体凝集体の精製事例Example of purification of antibody aggregates

　セルファインフェニルEXはモノクロ―ナル抗体から凝集体をフロースルーモードで除去するのに最適なクロマトグラフィー担体です。プロテインA担体で精製後のモノクロ―ナル抗体を用いて抗体凝集体を除去しました。セルファインフェニルEXは低い電気伝導度で高い凝集体除去性を有します。今回使用したサンプルの電気伝導度は6 mS/cmに調整しています。このため通常の疎水相互作用クロマトグラフィー充填剤でも問題となる高塩濃度による配管などの腐食、バッファーの析出を抑えることができます。

カラム: 1 mL ミニカラム
流速: 滞留時間4分（75cm/h）
サンプル: 精製後mAb 6.6 mg/mL, pH6, 6 mS/cm
抗体負荷量: 93 mg_mab/mL_CV
平衡化・洗浄: 20 mM AcOH-Tris + NaCl, pH6, 6 mS/cm

表に示す通り、モノクローナル抗体の凝集体は3.6%存在しましたが、セルファインフェニルEXに通すことで0.4%まで減少しました。

担体	凝集体量(カラム前）[%]	凝集体量（回収画分）[%]	抗体回収率[%]
セルファインフェニルEX	3.6	0.4	87
セルファインMAXフェニル	3.6	1.3	99

流速特性Pressure vs. Flow Properties

セルファインフェニルEXは高流速で使用できます。これはバイオ医薬メーカーに欠かせない特徴です。セルファインフェニルEXは、実製造で操作可能な流速特性を備えています。

カラム: 内径2.6 cm x 高さ19.3cm
温度: 23~25 ℃
移動相: 純水