セルファインTMMAX DexS-HbP, DexS-VirS
セルファインMAX DexSはデキストラン硫酸ポリマーをセルロース粒子の固定化した新しいアフィニティクロマトグラフィー充填剤です。 動物原料を使用していないので、ヘパリン固定化担体の代替品として安全に使用できます。 ヘパリンと同等のアフィニティ活性を持ちますので、ウイルス粒子や血液凝固因子などにアフィニティがあります。
セルファインMAX DexSシリーズには2つのラインナップがあります。
— DexS-HbPはヘパリン結合タンパク質に優れた吸着活性があるように設計されています。
— DexS-VirSはウイルスやウイルス粒子に優れた吸着活性があるように設計されています。
高度に架橋されたセルロース粒子をベース担体として採用しているため、高流速で操作することができます。 繰り返し使用ができるように0.5M NaOHでの定置洗浄に対する耐性があります。 各担体の特長をTable 1で紹介します。
| 製品の特長 | ||
|---|---|---|
| 製品名 | セルファイン MAX DexS-HbP | セルファイン MAX DexS-VirS |
| リガンド | デキストラン硫酸ポリマー | |
| ベース担体 | 高度架橋セルロース粒子 | |
| 平均径 | 40 -130 μm (ca 90μm） | |
| 硫黄含量 | ≥ 36 μmol/mL | ≥ 74 μmol/mL |
| リゾチーム吸着量 | ≥ 50 mg/mL | ≥ 56 mg/mL |
| pH安定性 | 3 - 12 | |
| 操作圧力 | < 0.3 MPa | |
Table 1Performance Characteristics of Cellufine MAX DexS resins
特徴Features
セルファイン MAX DexS-HbPは高度に架橋されたセルロース粒子にデキストラン硫酸ポリマーを固定化した群特異的アフィニティクロマトグラフィー充填剤です。 動物原料を使用しないため、ヘパリン固定化担体の代替品として、血液由来のタンパク質などの精製に安全に使用できます。 例えばラクトフェリン（Figure 1)やアンチトロンビンⅢなどに優れたアフィニティ活性を示します。
セルファイン MAX DexS-VirSによる
不活化インフルエンザウイルスの精製Capture
of Inactivated Influenza Virus with Cellufine MAX DexS-VirS
セルファインMAX DexS-VirSは鶏卵由来、細胞由来問わず、インフルエンザウイルス粒子を効率的に精製することができます。
鶏卵法で培養された不活化インフルエンザウイルス(A/duck/Hokkaido/Vac-2/2007 H7N7) をセルファインMAX DexS VirSで精製した結果を下の図に示します。
担体をカラム（5 mmID x 2.5cmL,0.49 mL)に充填後、10 mMリン酸,120 mM NaClバッファー（pH 7.4）で流速0.2 mL/min (60
cm/h、滞留時間2.5 min)で平衡化した。 ウイルスをロードした後、各フラクションを回収してＨＡ活性を血液凝集法によって測定して吸着量を求めた。
検討の結果はFig.2、Fig.3、Table 2に示す。 セルファイン MAX DexS-VirSは市販のアガロース担体と比較して優れたウイルス吸着量を示した。
- 担体
- セルファイン MAX DexS-VirS
- カラム
- I.D. 5.0 x 25 mmH (0.5 ml)
- ロードサンプル
- 鶏卵由来の漿尿膜液（不活化インフルエンザウイルスを含む）
- ウイルス株
- A/duck/Hokkaido/Vac-2/2007(H7N7)
- 流速
- 0.2 ml/min(60 cm/hr, R.T. 2.5 min)
- 平衡化バッファー
- 10 mM リン酸Na, 120 mM NaCl, pH 7.4
- 洗浄バッファー
- 10 mM リン酸Na150 mM NaCl, pH 7.4
- 溶出バッファー 1
- 10 mM リン酸Na, 500 mM NaCl, pH 7.4
- 溶出バッファー 2
- 10 mM リン酸Na, 2 M NaCl, pH 7.4
| 工程 | HA活性 | 総タンパク質量 | DNA | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| HAU | % | mg | % | ng/HAU | mg | % | pg/HAU | |
| サンプルロード | 204,800 | 100 | 6.4 | 100 | 31.3 | 24.7 | 100 | 120.6 |
| フロースルーフラクション | 7,760 | 3.8 | 4.1 | 64.2 | 530.7 | － | － | － |
| 溶出フラクション 1 | 139,520 | 68.1 | 0.4 | 5.9 | 2.7 | 3.0 | 12.0 | 21.3 |
| 溶出フラクション 2 | 64,160 | 31.3 | 0.1 | 1.5 | 1.5 | 3.4 | 13.9 | 53 |
| 回収率 | 211,440 | 103.2 | 4.6 | 71.6 | 21.7 | － | － | － |
Table 2Recovery of Inactivated Influenza Flu Viral particles with Cellufine MAX DexS-VirS
- セルファインTMMAX DexS-HbP, DexS-VirS
