Figure 3は大規模スケールでの、抗原精製の事例となります。抗HBS抗体をセルファインホルミルに固定化して、HBS（Ｂ型肝炎表面抗原）を高純度、高収率で精製することができました。 3,000Ｌの血漿を超えるロード量、30月を超える使用期間でも大きな劣化が無く、極めて安定的に抗原を精製出来ました。

　リガンド固定化担体を合成するために、45Ｌの抗HBS抗体を持つ馬血清を、硫安沈殿法で濃縮した。その後、0.2Ｍリン酸（pH7）,0.1Ｍ NaClにバッファー置換した。この操作で得られた抗体を含む血清を12Ｌのセルファインホルミルに反応させた。その後80 gの水素化シアノホウ素ナトリムを還元剤として加えて、4℃～ 8℃で24時間反応させて担体に共有結合させた 。得られたリガンド固定化担体を使用バッファーで洗浄後、カラムに充填した。
（ロードサンプルのヒト血清は、このカラムに使用する前に遠心分離、硫安沈殿、ゲルろ過担体を経て準備しています。）

レクチン（コンカナバリンA = ConA）をセルファインホルミルに固定化して、糖タンパク質RCA (ricinus communis agglutinin)を精製した事例をFig.4に示す。50mgのCon A を1mlの0.1M酢酸バッファー (pH 6.4)、1mM MgCl2、1mM MnCl2 、1mM CaCl2 、メチルα-Ｄ-マンノシドを含む溶液に懸濁して溶解したリガンドサンプルを0.5g（湿潤担体）のセルファインホルミルに加え4℃、終夜で反応した。その後、水素化シアノホウ素ナトリムを加えた後、4℃、終夜で反応させて共有結合した。

セルファインホルミルに固定化されているホルミル基（アルデヒド基）はタンパク質の一級アミノ基とシッフ塩基を形成します。次いで還元剤（水素化シアノホウ素ナトリウム。水素化法素ナトリウム等）を使用してシッフ塩基を還元して強固な共有結合にします。Table 2では一般的な固定化方法を述べています。

セルファインホルミルはリガンドを安定的に共有結合させるために還元剤を必要とします。還元剤を選定する場合、タンパク質リガンドを失活させないような還元剤を推奨しています。水素化ホウ素ナトリム(NaBH₄)、水素化シアノホウ素ナトリム(NaCNBH₃) 、トリメチルアミノボラン ((CH₃)₃NBH₃)などは使用実績も多く好適に使用できる還元剤です。いずれの還元剤も、10mg/g-湿潤担体以下で使用することができます。 還元剤量に関しては、リガンドリーク量、活性率を考慮しながらリガンドに最適な条件を探索する必要があります。

セルファインホルミルへのリガンドの固定化は迅速に反応が進行します。ですが、不安定な機能性タンパク質をリガンドとする場合、タンパク質の失活を防ぐために穏やかな反応条件にする必要があります。タンパク質の活性を指標として最適な反応条件を決定することで優れたリガンド固定化担体を合成することができます。反応時のパラメータにはpH条件、反応時間、反応温度などがあげられます。

カップリング効率(仕込量に対する固定化されたリガンド量）や固定化されたリガンド固定化量（担体に固定化されたリガンド濃度）はカップリング反応時のリガンド濃度、pH、反応温度、反応時間で容易に調整できます。産業スケールで使用する場合は、より良い固定化反応条件を探索することでコストパフォーマンスにすぐれたプロセスを構築することができます。