항체 정제
친화성 크로마토그래피

CellufineTMSPA-HC

항체 의약품의 정제에는 단백질 A를 리간드로 한 담체가 1단계 정제로 선택되어 있습니다.
이 단계에서는 세포 배양 후 배양 상청액을 대량으로 정제해야 하기에, 다음과 같은 특성을 갖춘 충전제를 선택하는 것이 중요합니다.

  1. ① 빠른 유속에 높은 흡착성을 지니게 되는 뛰어난 동적 흡착 성능
  2. ② 빠른 유속으로 액체를 통과시킬 수 있는 내압성
  3. ③ 재사용성

Cellufine SPA-HC는 독자적인 가교 방법을 통해 내압성을 대폭 높인 다공질 셀룰로스 입자에 알칼리 내성 단백질 A를 고정화한 재사용성이 높은 충전제입니다.
40년 업계에서 쌓은 경험을 통해 얻은 독자적인 입자 제조 기술로 빠른 유속에 높은 흡착 성능을 실현했습니다.
실제 제조 규모를 상정한 충전제로 설계하였기에 기존 설비를 활용하면서 리드 타임의 단축을 실현할 수 있습니다.

사양
리간드 알칼리 내성 단백질 A
담체 고가교 셀룰로오스 입자
평균 입자 크기 70um
사용유속 ≧650 cm/h (0.3 Mpa시) 내경 30 cm-침대 높이 20 cm, 순수 24 ℃에서 계측
동적 흡착량(DBC) ≧ 70 mg /ml (C10with Polyclonal IgG) 체류 시간 6분에서의 로드로 10% 브레이크 스루 포인트시의 계측
권장 CIP 솔루션 0.1 M NaOH
작동시 온도 4 - 50 ℃
보관 온도 2 - 8 ℃ in 20 % ethanol
화학 안정성 1주간의 침지 시험에서 흡착량에 열화는 보이지 않았다. 30% 이소프로판올, 20-70% 에탄올, 8M 우레아, 6M 구아니딘 하이드로클로라이드, 0.1M 아세트산
pH 안정성 3-12

알칼리 내성이 높은 단백질 A 크로마토그래피 충전제입니다.
실제 제조 규모에서 사용하는 컬럼을 쓸 수 있도록 입자 크기를 최적화했습니다. 그 결과 벽효과가 보이지 않게 되는 내경 30cm 컬럼을 사용해도 베드 높이 20cm로 충전할 수 있습니다. 단일클론 항체를 활용한 흡착 시험 결과, 체류 시간은 2분~6분에 50mg/ml~75mg/ml의 높은 흡착 성능을 실현했습니다.

특징Features

Cellufine SPA-HC는 독자적인 가교 방법을 통해 내압성을 대폭 높인 다공질 셀룰로스 입자에 알칼리 내성 단백질 A를 고정화한 재사용성이 높은 충전제입니다. 입자 제조에 최적화된 기술로 빠른 유속에 높은 흡착 성능을 실현했습니다. 실제 제조 규모를 상정한 담체로 설계하였기에 기존 설비를 활용하면서 리드 타임의 단축을 실현할 수 있습니다.

뛰어난 동적 흡착량Excellent dynamic binding capacity

Cellufine SPA-HC는 입자 크기를 최적화하여 짧은 체류 시간에도 뛰어난 동적 흡착량을 실현했습니다. 체류 시간 2분에 50mg/mL 이상의 뛰어난 흡착 성능을 구현할 수 있습니다. 빠른 유속·높은 흡착량이 특징이기에 단백질 A의 캡처 공정에서 리드 타임을 대폭 단축할 수 있습니다.

Ceollufine SPA-HC의 동적 흡착량의 측정 데이터, 폴리클로날 항체와 모노클로날 항체의 흡착량 데이터
Figure1동적 결합 용량 측정 인간 IgG 항체는 인간 혈액 유래의 시판하는 제품을 구매했다. 인간 단일클론 항체는 CHO 세포 배양에서 정제한 단일클론 항체를 사용했다.

높은 내압성과 액체 통과성Low back pressure at high flow rate

Cellufine SPA-HC는 독자적인 가교 기술을 통해 낮은 압력에서 빠른 유속으로 액체를 통과시킬 수 있습니다. Fig.2에서는 파일럿 규모의 컬럼(내경 10cm 컬럼에서 베드 높이 20cm)에서 선속과 압력의 관계를 보여 줍니다. 0.3MPa의 작동 압력에서는 체류 시간 2.4분의 유속으로 액체를 통과시킬 수 있습니다. 이때 단일클론 항체의 흡착량은 50mg/mL가 되었습니다. 일반적으로 사용되는 유속 범위의 체류 시간 6분에서는 단일클론 항체의 흡착량이 72mg/mL였습니다. 이때 압력은 0.07MPa에 불과했습니다.

Cellufine SPA-HC의 유속 특성 데이터
Figure2유동 특성 시험은 내경 10cm, 베드 높이 20cm의 컬럼(Axichrom 10/300, GE healthcare)을 활용해 실시했다. 이동상으로는 20~25℃의 순수를 사용했다.

항체 종류에 좌우되지 않는, 우수한 견고성을 갖춘 성능 구현Robust performance not depend the sort of monoclonal antibody

Cellufine SPA-HC는 항체의 종류에 좌우되지 않고 뛰어난 흡착 성능을 구현할 수 있습니다. Fig.3에서 볼 수 있듯이 다른 단일클론 항체를 사용해도 높은 흡착 성능을 유지했습니다.
우수한 견고성을 갖춘 Cellufine SPA-HC를 활용하여, 다운스트림 개발에서 불필요한 정제 개발 비용과 개발 기간을 줄일 수 있습니다.

Cellufine SPA-HC를 이용한 상이한 모노클로날 항체의 흡착 데이터
Figure3단일클론 항체로는 인간화 항체 전환체를 포함한 다양한 등전점의 항체를 사용했다.

뛰어난 재사용성Excellent reusability

베이스가 되는 기재로는 산·알칼리 조건에서 높은 내성을 보여 주는 천연 다당류 셀룰로스를 사용합니다. 또한 알칼리 내성이 높은 재편성 단백질 A를 고정화하여 뛰어난 알칼리 내성을 보여 줍니다. 0.1M의 수산화나트륨을 CIP 용액으로 사용한 경우, 노출 시간 15분에 150사이클로 액체를 통과시켜도 활성도는 95%를 유지했습니다.

Cellufine SPA-HC 반복 사용 데이터, 0.1M NaOH로 정치 세척
Figure40.1 M 수산화나트륨에 15분간 접촉한 경우의 세정 시험.
이 그림은 남아 있는 동적 결합 용량을 비율로 표시했다. 처음 10% 브레이크스루 DBC는 76mg/mL였다. 150사이클로 알칼리를 흡착한 후 DBC 흡착량은 72mg/mL로 변화했다. 이는 본 시험 종료 후 95%의 활성도가 남아 있었다는 것을 의미한다.

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