CellufineTMMAX DexS-HbP, DexS-VirS
Cellufine MAX DexS는 덱스트란 황산염 중합체를 셀룰로스 입자에 고정화한 새로운 친화성 크로마토그래피 충전제입니다. 동물 원료를 사용하지 않기에 헤파린 고정화 담체의 대체품으로 안전하게 사용할 수 있습니다. 헤파린과 동등한 친화성을 지니므로 바이러스 입자나 혈액 응고 인자 등에 친화성을 보여 줍니다.
Cellufine MAX DexS 시리즈에서는 두 가지를 제공하고 있습니다.
— DexS-HbP는 헤파린 결합 단백질에 뛰어난 흡착 활성도를 나타내도록 설계되어 있습니다.
— DexS-VirS는 바이러스나 바이러스 입자에 뛰어난 흡착 활성도를 나타내도록 설계되어 있습니다.
고도로 가교한 셀룰로스 입자를 베이스 담체로 채택했기에 빠른 유속에서 조작할 수 있습니다. 재사용할 수 있도록 0.5M NaOH의 제자리 세정에 내성을 지니고 있습니다. 각 담체의 강점을 Table 1에서 소개합니다.
| 제품 특징 | ||
|---|---|---|
| 제품명 | Cellufine MAX DexS-HbP | Cellufine MAX DexS-VirS |
| 리간드 | 덱스트란 황산 중합체 | |
| 베이스 캐리어 | 고도 가교 셀룰로오스 입자 | |
| 평균 직경 | 40 -130 μm (ca 90μm） | |
| 황 함량 | ≥ 36 μmol/mL | ≥ 74 μmol/mL |
| 리소자임 흡착량 | ≥ 50 mg/mL | ≥ 56 mg/mL |
| pH 안정성 | 3 - 12 | |
| 작동 압력 | < 0.3 MPa | |
Table 1Performance Characteristics of Cellufine MAX DexS resins
특징Features
Cellufine MAX DexS-HbP는 고도로 가교한 셀룰로스 입자에 덱스트란 황산염 중합체를 고정화한 군 특이적 친화성 크로마토그래피 충전제입니다. 동물 원료를 사용하지 않기에, 헤파린 고정화 담체의 대체품으로 혈액 유래 단백질 등의 정제 시 안전하게 사용할 수 있습니다. 예를 들면 락토페린(Figure 1)이나 항트롬빈 Ⅲ 등에 뛰어난 친화성을 보입니다.
Cellufine MAX DexS-VirS에 따른 비활성화 인플루엔자 바이러스 정제Capture of Inactivated Influenza Virus with Cellufine MAX DexS-VirS
Cellufine MAX DexS-VirS는 계란 유래, 세포 유래와 상관없이 인플루엔자 바이러스 입자를 효율적으로 정제할 수 있습니다.
계란 배양법으로 배양된 비활성화 인플루엔자 바이러스(A/duck/Hokkaido/Vac-2/2007 H7N7)를 Cellufine MAX DexS VirS로 정제한 결과를 아래 그림에서 볼 수 있습니다.
담체를 컬럼(5mm ID x 2.5cmL, 0.49mL)에 충전한 후 10mM 인산, 120mM NaCl 완충액(pH 7.4)에서 유속 0.2mL/min(60cm/h, 체류 시간 2.5 min)으로 평형화했다. 바이러스를 주입한 후 각 분획물을 회수해 HA 활성을 적혈구 응집법으로 측정하여 흡착량을 구했다. 검토 결과는 Fig.2, Fig.3, Table 2에서 볼 수 있다. Cellufine MAX DexS-VirS는 시판하는 아가로스 담체와 비교했을 때 뛰어난 바이러스 흡착량을 보여 주었다.
- 담체
- Cellufine MAX DexS-VirS
- 컬럼
- I.D. 5.0 x 25 mmH (0.5 ml)
- 로드 샘플
- 닭 계란 유래의 장뇨막액(불활성화 인플루엔자 바이러스 포함)
- 바이러스 균주
- A/duck/Hokkaido/Vac-2/2007(H7N7)
- 유속
- 0.2 ml/min(60 cm/hr, R.T. 2.5 min)
- 평형화 버퍼
- 10 mM 인산 Na, 120 mM NaCl, pH 7.4
- 세척 버퍼
- 10 mM 인산 Na150 mM NaCl, pH 7.4
- 용출 완충액 1
- 10 mM 인산 Na, 500 mM NaCl, pH 7.4
- 용출 완충액 2
- 10 mM 인산 Na, 2 M NaCl, pH 7.4
| 공정 | HA 활동 | 총 단백질 양 | DNA | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| HAU | % | mg | % | ng/HAU | mg | % | pg/HAU | |
| 샘플 로드 | 204,800 | 100 | 6.4 | 100 | 31.3 | 24.7 | 100 | 120.6 |
| 플로우 스루 분획 | 7,760 | 3.8 | 4.1 | 64.2 | 530.7 | － | － | － |
| 용출 분획 1 | 139,520 | 68.1 | 0.4 | 5.9 | 2.7 | 3.0 | 12.0 | 21.3 |
| 용출 분획 2 | 64,160 | 31.3 | 0.1 | 1.5 | 1.5 | 3.4 | 13.9 | 53 |
| 회수율 | 211,440 | 103.2 | 4.6 | 71.6 | 21.7 | － | － | － |
Table 2Recovery of Inactivated Influenza Flu Viral particles with Cellufine MAX DexS-VirS
- CellufineTMMAX DexS-HbP, DexS-VirS
