CellufineTMET Clean
엔도톡신 제거용 친화성 크로마토그래피 충전제 ET cleanIntroduction
Cellufine ET clean은 진구형의 셀룰로스 입자에 ε-폴리리신을 고정화한 크로마토그래피 충전제입니다. 원하는 샘플 용액에서 엔도톡신을 효율적으로 제거할 수 있습니다. ε-폴리리신은 25-35개의 ε-리신 중합체로 Streptomyces albulus로 얻을 수 있는 발효 제품입니다. 폴리리신은 식품 보존제로 사용되며 안전성이 높은 리간드입니다.
Cellufine ET clean은 구마모토 대학과의 공동 연구로 개발되었습니다. ε-폴리리신을 셀룰로스 입자에 안정적으로 고정화했습니다. 그리하여 제자리 세정(CIP)에서 사용되는 일반적인 약제, 예를 들면 0.2M NaOH 등에서 뛰어난 안전성을 볼 수 있습니다.
Cellufine ET clean은 대장균 등의 그람 음성균에서 발생하는 리포폴리사카라이드를 생리 식염수 등의 조건에서도 효율적으로 제거할 수 있습니다. 고염 농도의 조건에서도 엔도톡신은 이탈하지 않으므로, 단백질에서 엔도톡신을 제거하고 싶을 때 사용하기에 적합합니다. ε-폴리리신은 친화성 리간드입니다만, 단백질과 달리 가혹한 조건에서도 비활성화되지 않습니다.
Cellufine ET clean 구조Partial Structure
ET Clean의 특징Characteristics
| 제품명 | 보존액 | 평균 직경 | 기공 크기* |
|---|---|---|---|
| Cellufine™ET Clean S | 20% 에탄올 수용액 | ca. 40-130 μm | Mlim 2000 |
| Cellufine™ET Clean L | 20% 에탄올 수용액 | ca. 40-130 μm | >Mlim 2x106 |
*세공 크기가 다른 분자량의 풀루란, 말토스를 지표로 삼아 겔 여과 분석해서 계산했다.
소 혈청 알부민(BSA)에서 엔도톡신의 선택적 흡착Selective adsorption of endotoxin (LPS) from a bovine serum albumin (BSA) solution by Cellufine ET clean beads.
0.2g의 습윤 담체에 2mL의 샘플(BSA: 500 μg/ml, E. coli O111: B4 LPS: 100 ng/ml, pH 7.0, ionic strength of μ = 0.05-0.8)을 추가해 교반 후, 샘플 상청액 내 엔도톡신의 양을 측정했다.
다양한 단백질에서 효율적으로 엔도톡신을 제거할 수 있습니다.Selective removal of endotoxin from a protein solution by Cellufine™ ET clean beads.
| 샘플 | Cellufine™ ET Clean S | Cellufine™ ET Clean L | |||
|---|---|---|---|---|---|
| 단백질(pI) | 제거 전 엔도톡신 양（pg/ml) | (0.02M PB, pH7.0, μ=0.0) | (0.02M PB + 0.36M NaCl, pH7.0, μ=0.40) | ||
| 제거 후의 엔도톡신량(pg/ml) | 단백질 회수율(%) | 제거 후의 엔도톡신량(pg/ml) | 단백질 회수율(%) | ||
| Ovalbumin(4.6) | 28,000 | 81 | 99 | <10 | 95 |
| BSA(4.9) | 32,000 | 45 | 99 | <10 | 97 |
| Myoglobin(6.8) | 4,500 | 18 | 99 | <10 | 98 |
| γ-globulin(7.4) | 5,600 | 20 | 99 | <10 | 97 |
| Cytochrome C(10.6) | 1,500 | 15 | 99 | <10 | 98 |
0.3mL의 ET clean에 2ml의 단백질 용액(1 mg/ml, LPS: 각종 단백질 시약에 혼입되어 있던 것)을 추가했다. 1 endotoxin unit (EU) ＝250pg LPS로 환산 가능하다. ET clean S는 제거율이 뛰어나며 ET clean L은 제거량에서 뛰어나다.
실제 사례 소개Application Data
ET clean L로 BSA에서 엔도톡신 제거
작동조건
- 컬럼
- 1 X 1.1 cm (I.D.) (1.1ml)
- 유속
- 0.17 ml / min (10cm / h)
- 흡착 버퍼
- 50 mM PB, pH 7 + 0.15 mol NaCl aq
측정 방법
- 단백질
- 분광 광도계 280 nm 흡수
- 엔도톡신
- LAL 테스트
- 주입 샘플 (150 ml)
- BSA 1 mg/ml、엔도톡신 스파이크 농도 100 EU/ml
ET clean L로 계란 흰자 라이소자임에서 엔도톡신 제거
작동조건
- 컬럼
- 10 x 0.9 cm (I.D.) (9.6 ml)
- 유속
- 0.5 ml / min (47 cm / h)
- 흡착 버퍼
- 1 mM Tris-HCl, pH 7.3
- 그라디언트
- 0 → 1.0 mol / l NaCl aq.
측정 방법
- 단백질
- 분광 광도계 280 nm 흡수
- 엔도톡신
- LAL 테스트
- 주입 샘플 (1ml) : 리소자임 농도14 mg / ml
ET clean L로 인슐린 α쇄에서 엔도톡신 제거
- 주입 샘플(1ml) : 인슐린 알파 사슬13 mg / ml,、엔도톡신309 EU / ml
ET clean L로 트랜스페린에서 엔도톡신 제거
- 주입 샘플(1ml) : 트랜스페린13 mg / ml、엔도톡신2982 EU / ml
참고문헌References
1) M. Sakata, M. Todokoro, C. Hirayama, American Biotechnol. Lab., 20 (2002) 36.
2) M. Todokoro, M. Sakata, S. Matama, M. Kunitake, J. Ohkuma, C. Hirayama, J. Liq. Chrom. & Rel. Technol., 25 (2002) 601.
- Cellufine ET Clean S
- Cellufine ET Clean L
