CellufineTM MAX AminoButyl
최근 몇 년간 복잡한 구조를 지닌 생체 고분자의 분리·정제에, 리간드로서 다른 성질을 지닌 믹스 모드형 분리제가 주목받고 있습니다. Cellufine MAX AminoButyl은 소수기인 부틸기와 이온 교환기가 되는 일급 아민을 리간드에 지닌 Cellufine으로, 특히 소수성이 강한 바이러스 유사 입자(Virus like particles)의 분리·정제용으로 설계되어 있습니다.
리간드 구조를 Fig.1에서 볼 수 있습니다.
Cellufine MAX AminoButyl의 규격과 특징을 Table 1 및 2에서 볼 수 있습니다.
| 품목 | |
|---|---|
| N함량 (μmol/ml) | 20 - 33 |
|
용출 부피 (ml) α-키모트립시노겐 A (소수 모드) 펩신 (이온 교환 모드) |
12.0 - 17.0 12.0 - 17.0 |
| 이형 입자 (%) | < 5 |
Table 1Cellufine MAX AminoButyl 표준
| 베이스 기재 | 고도 가교 셀룰로오스 입자 |
|---|---|
| 입자 직경 | 90μm (40 – 130 μm) |
| 리간드 | 부틸기 + 1급 아미노기 |
| 2M (NH4)2SO4조건 하에서의 흡착착 특성(1) | α-키모트립시노겐 A; ＋ 리보뉴클레아제A; － 리소자임; － |
| 20 mM Tris-HCl (pH7.5) 조건 하에서의 흡착착 특성(2) | 트랜스페린; － BSA; + 펩신; + |
+; adsorption, －; no adsorption
Table 2Cellufine MAX AminoButyl의 특징
베이스 담체는 고도로 가교한 셀룰로스 입자이기에 Cellufine MAX AminoButyl은 Fig.2와 같이 뛰어난 유동 특성을 보여 줍니다.
条件; 컬럼; 2.2 cm ID x 20 cm, 이동상; 순수 (24±1℃)
Cellufine MAX AminoButyl 사용 사례
Cellufine MAX AminoButyl을 활용해 효모에서 r-HBsAg(재조합 B형 간염 표면 항원) VLP 정제
部부분적으로 정제된 r-HBsAg VLP 용액을 Cellufine MAX AminoButyl 컬럼(16mm I.D. x 500mm H)에 주입하고, 컬럼을 20 mM 인산 완충액(pH 7.0)으로 충분히 세정했습니다. 처음에는 0.1% Triton X를 포함한 인산 완충액(pH 7.0)을 용출액으로 사용했습니다(용출 1). 다음으로 분자를 2M NaCl으로 용출했습니다(용출 2). 각 분획을 회수해 분석했습니다.
아래 그림은 Cellufine MAX AminoButyl에 의한 r-HBsAgVLP의 정제 크로마토그램을 보여 줍니다. r-HBsAg VLP는 ELISA를 통해 검출했습니다.
| VLP | 단백질 | |||
|---|---|---|---|---|
| nU | % | ug | % | |
| 샘플 로드 | 4,260 | 100 | 2,320 | 100 |
| 플로우 스루 | 480 | 11 | 350 | 13 |
| 용출 1 | 2,060 | 48 | 770 | 30 |
| 용출 2 | 172 | 4 | 1,190 | 46 |
크로마토그래피 처리 후 평가
대부분의 r-HBsAg는 용출 1의 분획으로 용출되었습니다. 단백질 분석 결과를 통해 계면 활성제를 사용한 용출 1에서 r-HBsAg가 농축된 것을 알 수 있었습니다. 이 결과로 Cellufine MAX AminoButyl이 VLP의 정제에 유용하다는 것을 알 수 있습니다.
화학 안정성 및 제자리 세정
셀룰로스는 화학적 및 물리적 안정성을 갖춘 천연물로 잘 알려져 있습니다. Cellufine은 셀룰로스 입자이므로 화학 약품이나 알칼리성 용액 및 산성 용액에서도 안정을 유지합니다. Cellufine 충전제 대부분의 제자리 세정은 0.5M NaOH 용액으로 실시할 수 있습니다. 사용한 충전제는 세정 후, 2~25℃에서 20% 에탄올에 보관해야 합니다.
