Cellufine™ MAX AminoButyl
최근 몇 년간 복잡한 구조를 지닌 생체 고분자의 분리·정제에, 리간드로서 다른 성질을 지닌 믹스 모드형 분리제가 주목받고 있습니다。Cellufine™ MAX AminoButyl은 소수기인 부틸기와 이온 교환기가 되는 일급 아민을 리간드에 지닌 Cellufine™으로, 특히 소수성이 강한 바이러스 유사 입자(Virus like particles)의 분리·정제용으로 설계되어 있습니다.
리간드 구조를 Fig.1에서 볼 수 있습니다.
Cellufine™ MAX AminoButyl의 규격과 특징을 Table 1 및 2에서 볼 수 있습니다.
| 품목 | |
|---|---|
| N함량 (μmol/ml) | 20 - 33 |
|
용출 부피 (ml) α-키모트립시노겐 A (소수 모드) 펩신 (이온 교환 모드) |
12.0 - 17.0 12.0 - 17.0 |
| 이형 입자 (%) | < 5 |
Table 1Cellufine™ MAX AminoButyl 표준
| 베이스 기재 | 고도 가교 셀룰로오스 입자 |
|---|---|
| 입자 직경 | 90μm (40 – 130 μm) |
| 리간드 | 부틸기 + 1급 아미노기 |
| 2M (NH4)2SO4조건 하에서의 흡착착 특성(1) | α-키모트립시노겐 A; ＋ 리보뉴클레아제A; － 리소자임; － |
| 20 mM Tris-HCl (pH7.5) 조건 하에서의 흡착착 특성(2) | 트랜스페린; － BSA; + 펩신; + |
+; adsorption, －; no adsorption
Table 2Cellufine™ MAX AminoButyl의 특징
베이스 담체는 고도로 가교한 셀룰로스 입자이기에 Cellufine™ MAX AminoButyl은 Fig.2와 같이 뛰어난 유동 특성을 보여 줍니다.
条件; 컬럼; 2.2 cm ID x 20 cm, 이동상; 순수 (24±1℃)
Cellufine™ MAX AminoButyl 사용 사례
Cellufine™ MAX AminoButyl을 활용해 효모에서 r-HBsAg(재조합 B형 간염 표면 항원) VLP 정제
부부분적으로 정제된 r-HBsAg VLP 용액을 Cellufine™ MAX AminoButyl 컬럼(16mm I.D. x 500mm H)에 주입하고, 컬럼을 20 mM 인산 완충액(pH 7.0)으로 충분히 세정했습니다. 처음에는 0.1% Triton X를 포함한 인산 완충액(pH 7.0)을 용출액으로 사용했습니다(용출 1). 다음으로 분자를 2M NaCl으로 용출했습니다(용출 2). 각 분획을 회수해 분석했습니다.
아래 그림은 Cellufine™ MAX AminoButyl에 의한 r-HBsAgVLP의 정제 크로마토그램을 보여 줍니다. r-HBsAg VLP는 ELISA를 통해 검출했습니다.
| VLP | 단백질 | |||
|---|---|---|---|---|
| nU | % | ug | % | |
| 샘플 로드 | 4,260 | 100 | 2,320 | 100 |
| 플로우 스루 | 480 | 11 | 350 | 13 |
| 용출 1 | 2,060 | 48 | 770 | 30 |
| 용출 2 | 172 | 4 | 1,190 | 46 |
크로마토그래피 처리 후 평가
대부분의 r-HBsAg는 용출 1의 분획으로 용출되었습니다. 단백질 분석 결과를 통해 계면 활성제를 사용한 용출 1에서 r-HBsAg가 농축된 것을 알 수 있었습니다. 이 결과로 Cellufine™ MAX AminoButyl이 VLP의 정제에 유용하다는 것을 알 수 있습니다.
화학 안정성 및 제자리 세정
셀룰로스는 화학적 및 물리적 안정성을 갖춘 천연물로 잘 알려져 있습니다. Cellufine™은 셀룰로스 입자이므로 화학 약품이나 알칼리성 용액 및 산성 용액에서도 안정을 유지합니다. Cellufine™ 충전제 대부분의 제자리 세정은 0.5M NaOH 용액으로 실시할 수 있습니다. 사용한 충전제는 세정 후, 2~25℃에서 20% 에탄올에 보관해야 합니다。
