技术专栏
本专栏是介绍有关生物医学下游色谱工艺的专栏。介绍诸如单克隆抗体、疫苗、基因、病毒载体等的纯化技术。 您将能够使用这些技术来构想Cellufine产品的下游工艺构成。
用Cellufine产品从CHO培养上清液中纯化单克隆抗体
用三步层析从CHO细胞培养上清液中纯化单克隆抗体。 实验中使用了Cellufine SPA-HC，Cellufine MAX Q-h和Cellufine MAX GS。
使用纤维素系色谱载体（Cellufine）的高效单克隆抗体精制方法
在单克隆抗体（mAb）生产工艺的下游（精制工艺），蛋白质A柱的捕获工艺以及被称为纯化（Polishing）的去除杂质工艺，通常采用色谱分离方法。此次我们介绍的是把在该纯化工艺中所使用的2个层析柱连接，并进一步在流穿模式下使用的方法（FT-FT模式）。
使用Cellufine亲和载体及混合模式载体的单克隆抗体纯化的两步法纯化
本报告中报告了通过Protein A色谱实施的捕获工序与通过Cellufine MAX IB实施精制（polishing）工序的两步法纯化，实现单克隆抗体的高纯度纯化的方法。通过实现两步法纯化，能够减少下游工序的纯化设备投资，并实现降低运营成本。
使用 Cellufine Sulfate 的人冠状病毒 OC43 的 纯 化事例
本报告将介绍通过病毒纯化经验丰富的Cellufine Sulfate实施的hCoV OC43的纯化示例。β冠状病毒hCoV OC43是通过Cellufine Sulfate进行高纯度纯化后的病毒。Cellufine Sulfate是对β属冠状病毒纯化有效的色谱载体。
用Cellufine Phosphate精制T7RNA聚合酶
近年来，mRNA疫苗作为一种非常有名的新冠（COVID-19）疫苗，在mRNA疫苗的生产工序中，就会用到T7 RNA聚合酶。 本文介绍的例子就是在大肠杆菌（pAR1219）中表达RNA聚合酶之后，再利用Cellufine Phosphate和Cellufine MAX DEAE(弱阴离子交换介质)精制其高纯度发酵液。 利用Cellufine Phosphate这种亲和层析介质能够精制纯度极高的酶。
通过CellufineTM对Streptococcus pneumoniae血清型19F的莢膜多糖类的纯化
肺炎链球菌是肺炎的主要病原体之一，在全世界尤其是儿童和老年人会引发高患病率和高死亡率。 最重要的毒性因子之一是细菌表面的莢膜多糖(CPS) ，基于该莢膜多糖的肺炎球菌疫苗被用于预防这些传染病。 以往的乙醇沉淀采用以纯化适合绝大多数血清型的CPS为目的的常规流程。但是，这些工艺复杂且用时较长。 这里将提出无需采用乙醇沉淀的简易化2步CPS层析纯化流程提案。这种流程采用了疏水相互作用层析 (HIC)及阴离子交换层析 (AEX)。 本文将介绍实现这种流程最优化的2种层析介质Cellufine MAX Butyl HS和Cellufine MAX Q-hv。
简单易懂的抗体药物制造方法讲解
抗体药物因针对特定病原体和疾病具有较高的特异性和有效性，近年来受到医学界的广泛关注。然而，制造过程极其复杂，需要先进的技术。本次我们将深入浅出地讲解抗体药物的制造工序。
以纤维素载体MLP为载体的AEX色谱填料实现完整AAV颗粒与空壳AAV颗粒的分离
针对AAV制造过程中亟待解决的DNA未封装（空壳）颗粒的去除问题，我们开发并评估了一种以具有连续孔的纤维素来源的整体状颗粒（MLP）为载体的AEX色谱填料。通过控制粒径和细孔径，与传统的AEX色谱填料相比，其动态结合容量和分离能力均得到提升。将50L培养来源的原料进行AFF纯化后，再用本填料进行精纯处理，结果显示，单次精纯纯度可达91.1%，两次精纯纯度可达97.4%，实现了高纯度纯化。本填料作为可替代密度梯度超速离心法的可扩展空壳颗粒去除技术十分有效，有助于实现高纯度（约95%完整颗粒）且高回收率的AAV制剂生产。＊本资料是在2024年国际生物工艺大会（波士顿）上发布的资料。
面向疫苗纯化靶向的硫酸拟亲和色谱用纤维素整体状颗粒的开发
针对大分子生物高分子，特别是作为疫苗的病毒颗粒的纯化需求，我们开发并评估了一种以具有连续孔的纤维素来源的整体状颗粒（MLP）为载体的色谱填料。经硫酸葡聚糖修饰的MLP 1000 DexS通过亲和作用展现出高动态结合容量和高回收率，在甲型流感（H1N1）方面，实现了超过传统色谱填料的吸附量和杂质去除效果。因其高强度、低反压的特性，对扩大生产规模十分有用，能够为疫苗制造下游工序的提效做出贡献。＊本资料是在2024年国际生物工艺大会（波士顿）上发布的资料。
采用多模式色谱（MMC）填料降低单克隆抗体纯化过程中的宿主细胞蛋白（HCP）含量
我们开发并评估了一种新型多模式色谱（MMC）填料，该填料可有效用于蛋白A色谱后的精纯步骤。它是以具有连续孔的纤维素来源的整体状颗粒（MLP）为载体，对长链烷基进行伯胺修饰的色谱填料。通过优化孔径，即使在高负载情况下也能强力降低宿主来源蛋白（HCP）含量。在流穿模式下使用，可实现单克隆抗体（mAb）的回收率约99％，HCP含量最低可降至8 ppm。由于该填料受停留时间影响小，有助于通过高流速纯化缩短处理时间。＊本资料是在2024年国际生物工艺大会（波士顿）上发布的资料。
为实现下一代模式的病毒颗粒纯化技术而开发具有连续孔的纤维素来源整体状颗粒（MLP）
我们开发了具有连续孔的纤维素来源的整体状颗粒（MLP），其专门用于疫苗及基因治疗原料药的大分子病毒颗粒等的纯化。其多孔结构拥有直通细孔（模式半径约1.5µm），能让目标物质高效渗透至颗粒内部，实现卓越的动态结合容量。经硫酸葡聚糖修饰的MLP 1000 DexS在甲型流感和新冠病毒（SARS - CoV - 2）的纯化过程中，展现出高回收率和高纯度的杂质去除效果。此外，经AEX修饰的填料在AAV空壳/完整衣壳的分离方面，已证实其性能优于现有产品。我们将持续推进其作为对下一代模式极为有效的色谱填料的全新开发。＊本资料是在2025年国际生物工艺大会（波士顿）上发布的资料。
全新开发的Cellufine™ Phosphate HC可实现T7 RNA聚合酶及其他大型生物分子的高效纯化
Cellufine™ Phosphate HC是一种具有扩展细孔孔容的新型高吸附色谱填料。其纤维素颗粒表面修饰有独特的磷酸基配体，特别适用于30 kDa以上的大型核酸结合蛋白纯化，无需His标签即可实现高效纯化。在T7 RNA聚合酶的纯化中，其动态结合容量较传统产品提升约9倍。从大肠杆菌裂解物中进行纯化时，第一步使用Cellufine™ MAX DEAE降低DNA和杂质含量，第二步用Cellufine™ Phosphate HC进行亲和纯化，第三步通过Cellufine™ ET Clean L降低内毒素含量。通过这三步纯化工艺，可快速获得高活性、高纯度的终产物。＊本资料是在2025年国际生物工艺大会（波士顿）上发布的资料。
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