CellufineTMGCL-2000HF
凝胶过滤层析法是一种利用分子量的差异分离蛋白质等纯化对象的分离模式。由于其采用的原理是需要减小粒径来提高分离性能，因此这种分离模式存在高流速下无法操作或大型色谱柱情况下无法使用等诸多问题。凝胶过滤层析法的这一特性成为工艺设计过程中的瓶颈所在。
为消除此瓶颈，Cellufine GCL-2000HF 的开发应运而生。 Cellufine GCL-2000HF以真球形交联纤维素粒子为基质，具有很高的物理强度，能够在高流速下操作，因此可以在产业规模下使用。 此外，由于其还具有最适于蛋白质分离的细孔容积，因此能发挥出色的分离性能。
特征
- 良好刚性的球形颗粒
- 出色的机械强度
- 亲水性
- 高孔容积
- 選択分离范围广泛
- 预溶胀胶
- 很高的化学稳定性
- 可121℃30分钟高压灭菌
优势
- 在大直径的生産層析柱中也具有高流量兼容性
- 泵送或搅拌不会产生碎胶
- 低非特异性吸附和高回收率
- 良好的載量
- 优化選択可至所需要的分子量范围
- 无需耗时的溶胀程序
- 可用于所有常见的盐，清洁剂，离液剂，有机溶剂
- 无热源
- 可灭菌处理
- 完整的质量管理体系
| 基础参数 | |
|---|---|
| 基质 | 交联纤维素 |
| 粒子形状 | 球形 |
| 粒径 | ca. 40-130 μm |
| 耐化学性 | 填料可使用大多数盐，洗涤剂，溶剂，酸和碱，包括8M尿素，6M盐酸胍， 0.1M HCL和0.5M NaOH |
| 机械强度 | 填料可承受蠕动泵输送和磁力搅拌 |
| 收缩/溶胀 | 随着pH或离子强度变化凝缩或溶胀 <3％。溶剂的收缩或溶胀因溶剂和介质而异。 |
| 可高圧滅菌 | 121 °C 30 分钟 |
| 储存 | 悬浮于14%的乙醇水溶液中 |
筛选分離範囲
该填料提供了非常广泛的分离选择范围： Cellufine GCL-2000和Cellufine GCL-2000HF的独特性能可用于分离高分子量蛋白质复合物。 表1显示了不同蛋白的排阻極限。
| 蛋白质 | MW | Kav |
|---|---|---|
| 甲状腺球蛋白 | 660,000 | 0.00 |
| 免疫球蛋白G | 155,000 | 0.45 |
| 牛血清白蛋白 | 66,000 | 0.52 |
| 胰凝乳蛋白酶原A | 25,700 | 0.62 |
| α-胰凝乳蛋白酶 | 25,200 | 0.62 |
| 肌红蛋白 | 17,000 | 0.63 |
| 溶菌酶 | 14,300 | 0.70 |
| 核糖核酸酶A | 13,700 | 0.70 |
| 杆菌肽 | 1,400 | 0.91 |
Table 1
压力流量曲线
蛋白质回收率
| 蛋白质 | 回收率（％） |
|---|---|
| 过氧化氢酶 | 100 |
| 免疫球蛋白G | 100 |
| 醛缩酶 | 100 |
| 血清白蛋白 | 100 |
| 乳球蛋白 | 100 |
| 核糖核酸酶 | 100 |
| 细胞色素 C | 100 |
| 溶菌酶 | 100 |
| 胰凝乳蛋白酶原A | 99 |
| 肌红蛋白 | 97 |
卓越的稳定性（加速试验））
Cellufine GCL-2000HF是将作为物质极其稳定的纤维素粒子交联结合的凝胶过滤层析载体。在40℃的温度条件下，将其保存于20%的乙醇存储液后，然后测量细孔容积（图3）。即使在6个月后，它仍能保持稳定的细孔容积。
纤维素是一种极为耐热的多糖类物质。正在被用作层析载体的琼脂糖由于与纤维素一样同为多糖类，具有许多羟基。因此它与纤维素一样，具有非特异性吸附少的特点，但另一方面，琼脂糖却很容易在高温的水中被溶解，所以琼脂糖具有不耐热的缺点。纤维素虽然是具有羟基的多糖类物质，但由于纤维素间的结晶结构，使它拥有物理强度变高等琼脂糖所不具备的这一极其优异的特性。
卓越的稳定性（保存试验）
Cellufine GCL-2000HF在30℃的温度下保存于20%的乙醇存储液中，探查其细孔容积此后的经时变化（图4）。从中可以看出它在很长一段时间内都表现出卓越的稳定性。
