Cellufine Phenyl EX
Cellufine Phenyl EX是一种通过独有的配基修饰技术能高效去除抗体药物聚集体的色谱填料。 抗体聚集体在获得补充的同时,多数的抗体单体会直接被回收至流穿部分。其能够用于有选择性地吸附此类杂质的流穿精纯。
特长 | |||
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产品 | Cellufine Phenyl EX | Cellufine MAX Phenyl | Cellufine MAX Phenyl LS |
基质 | 交联纤维素 | 高度交联纤维素 | 高度交联纤维素 |
粒径 | ca. 40~130 μm | ||
配基 | 苯基(Phenyl) | ||
BSA吸附量 (mg/ml) | 13 | 11 | 4 |
BSA洗脱效率 (%) | 30 | 40 | 90 |
操作压力 | < 0.2 MPa | < 0.3 MPa | < 0.3 MPa |
pH稳定性 | pH 2 ~ 13 | ||
保存方法 | 20 %乙醇、浆液状 |
化学结构Chemical structure
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Cellufine Phenyl EX
配基
模型蛋白的分离行为Model Protein Separation
疎水相互作用色谱的最佳配基量(即:疎水性强度)会因用途而异。 图所示的是Cellufine Phenyl EX、Cellufine MAX Phenyl的蛋白质分离行为。 从该结果可知蛋白质的吸附强度为Cellufine Phenyl EX > MAX Phenyl。 也就是说,疏水性的强度也是 Cellufine Phenyl EX > Cellufine MAX Phenyl。

- 层析柱
- 6.6 mm ID x 50 mm L
- 缓冲液A
- 10 mM磷酸缓冲液(pH 7)
- 缓冲液B
- 10 mM磷酸缓冲液(pH 7) +1.5 M硫酸铵
- 蛋白质
- 核糖核酸酶 A、溶菌酶、糜蛋白酶原 A
抗体聚集体的纯化Example of purification of antibody aggregates
Cellufine Phenyl EX是最适于采用流穿模式去除单抗聚集体的色谱介质。 通过ProteinA介质使用纯化后的单克隆抗体去除了抗体聚集体。 Cellufine Phenyl EX具有低导电性和较强的聚集体去除性的特点。本次使用的试样的导电性调整为6 mS/cm。 因此,即使是通常的疎水相互作用色谱填料,也能够抑制因高盐浓度造成的配管腐蚀、缓冲液析出等问题。

- 层析柱
- 1 mL Mini-Column
- 流速
- 滞留时间4分钟(75cm/h)
- 试样
- 纯化后mAb 6.6 mg/mL, pH6, 6 mS/cm
- 抗体负载量
- 93 mg_mab/mL_CV
- 平衡化及清洗
- 20 mM AcOH-Tris + NaCl, pH6, 6 mS/cm
如表所示,虽然单抗聚集体存在3.6%,但是流经通过Cellufine Phenyl EX后降至0.4%。
介质 | 聚集体量(层析柱前)[%] | 聚集体量(回收部分)[%] | 抗体回收率[%] |
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Cellufine Phenyl EX | 3.6 | 0.4 | 87 |
Cellufine MAX Phenyl | 3.6 | 1.3 | 99 |
流速特性Pressure vs. Flow Properties
Cellufine Phenyl EX能够以高流速使用。该特性对于生物医药厂家而言是必不可少的特征。 所有的Cellufine Phenyl EX都具备实际制造时可操作的流速特性。

- 层析柱
- 内径2.6 cm x 高19.3cm
- 温度
- 23~25 ℃
- 流动相
- 纯水 以压缩系数1.35装填。这里所示的是除去系统压力后的树脂所承受的压力。
反复使用
Cellufine Phenyl EX能够反复使用。定置清洗使用在0.5 M 氢氧化钠中加入30 %异丙醇的清洗液。通过使用适当的清洗液进行定置清洗,即使反复使用60次后吸附性能也未发生变化

- 层析柱
- 1 mL Mini-Column
- 试样
- 人丙种球蛋白 2 mg/mL、平衡缓冲液
- 平衡
- 20 mM磷酸缓冲液+ 0.5 M 硫酸铵, pH7.0
- 洗脱
- 20 mM 磷酸缓冲液 , pH7.0
- 定置清洗
- 0.5M NaOH+30% IPA(10 CV、暴露时间: 20分钟)