Cellufine™ Sulfate
用于病毒、病毒/微生物抗原和肝素结合蛋白的浓缩、纯化以及去除内毒素。
疫苗和临床诊断方面的进步已经产生了对大量高纯度和浓缩的病毒以及病毒或微生物抗原的日益增长的需求。 Cellufine™ Sulfate亲和填料是一种简单、快速、有效的浓缩、纯化和去除這些重要产品的热原。
Cellufine™ Sulfate不仅可消除传统的超速离心沉降法和密度梯度方法的繁琐、耗时和潜在的不安全性，还能显著提高浓度和纯度。 Cellufine™ Sulfate可以减少或消除与固定化硫酸葡聚糖、硫酸软骨素或肝素有关的损耗、配体泄漏和重现性问题。
通过离子强度的简单逐步或梯度增加来影响结合产物的洗脱。
特征Features
- 对多种活病毒、灭活的或结构分裂的病毒、微生物抗原和肝素结合蛋白具有亲和力。
- 封闭柱操作确保安全性和产品无菌
- 内毒素不结合，可快速和无污染的去除热原
- 刚性，高强度微球
- 可高压灭菌
优势Benefit
- 比超速离心更有效去除培养基和宿主细胞中的污染物
- 避免过多的产品处理和安全问题，尤其是病毒制剂
- 同时浓缩和纯化可提高产量，减少加工步骤，时间和成本
- 温和的结合和洗脱条件提供高容量和产品产量
- 抗压缩，即使在大型色谱柱中也能为高速处理提供快速流动，使其易于放大
- 耐碱性化学除热原，可用福尔马林化学灭菌
| 特点 | |
|---|---|
| 基质 | 纤维素 |
| 粒径 | ca. 40 – 130 µm |
| 颗粒形状 | 球形 |
| 排阻极限 | 3kD |
| 活化基团 | 硫酸酯 |
| 总硫 | >700 µg/g dry |
| 蛋白 溶菌酶 : 乙型肝炎表面抗原 : |
>3 mg/ml 7 mg/ml |
| 环境耐受性 | 耐0.1M NaOH，含有0.1％的37％福尔马林 |
| 工作压力 | <0.3 MPa |
| 高温高压灭菌 | 在中性pH下悬浮; 121°C 30分钟 |
| 存储 | 14%的乙醇悬浮液 |
流动特性Flow Properties
The nearly rigid properties 球形纤维素基质的良好刚性特性使其拥有出色的流动性，特别是在大型生产柱中
- 层析柱 A
- 90 x 200 mm
- 层析柱 B
- 350 x 200 mm
病毒，病毒/微生物抗原Virus, Viral/Microbial Antigens
| 病毒 | 病毒/微生物制剂 |
|---|---|
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| *这些应用案例由美国和海外专利提供。 请查询有关详情和经营许可。 |
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Table 1There are many applications of Cellufine™ Sulfate in the concentration or
purification of viral and microbial anifigensm proteins and viruses.
用Cellufine™ Sulfate纯化人冠状病毒（OC43）的实例Example of purification of human coronavirus (OC43) with Cellufine Sulfate
- Column
- I.D. 5 mm x height 15 mm (0.3 ml)
- Sample
- Vero cell lysate including BPL-inactivated virus
- Virus strain
- Human corona virus(HCoV) OC43
- Flow rate
- 0.3 ml/min (residence 1 min)
- Equilibration
- 10 mM sodium phosphate, 150 mM sodium chloride, pH 7.4
- Elution
- 10 mM sodium phosphate, 2 M sodium chloride, pH 7.4
狂犬病病毒纯化Refinement case of a virus of rabies
图3中的示例说明了用Cellufine™ Sulfate在传统的病毒制剂上获得的高度濃縮、纯化和収率。
- 层析柱
- 50 x 70 mm (140 ml)
- 缓冲液
- 0.01M磷酸盐(pH 7.2)
- 洗脱
- 1M NaCl/0.01M磷酸盐(pH 7.2)
| 上样 | 洗脱 | |
|---|---|---|
| 体积 (ml) | 4,200 | 50 |
| 病毒滴度 | 32 | 4,096 |
| 蛋白质 (µg/ml) | 8.5 | 14 |
| 收率 (%) | 100 | 152 |
| 纯化因子 | 79x | |
| 浓度系数 | 126x |
Table 2Concetration and Purification of virus with Cellufine™ Sulfate
流感病毒纯化Refinement case of the flu virus
将鸡蛋尿囊液直接加载到33.3 mL凝胶柱床上，在洗脱液中回收了94.5％的病毒
| 体积(ml) | 病毒滴度 Titer | TCA-N µg/ml | 收率(%) | 纯化倍数 Purification | |
|---|---|---|---|---|---|
| 尿囊液 | 4200 | 77 | 337.1 | 100 | 1 |
| 洗涤 | 6700 | 1 | 209.2 | 2.1 | - |
| 洗脱 | 170 | 1797 | 448.0 | 94.5 | 20.1 |
Table 3Purification of Influenza virus from hen's egg allantoic fluid
- 层析柱
- 50 x 170 mm
- 缓冲液
- 0.01M 磷酸盐 pH 7.4
- 洗涤
- 0.01M 磷酸盐 pH 7.2 + 0.2M 氯化钠
- 洗脱
- 0.01M 磷酸盐 pH 7.0 + 1.5M 氯化钠
抗原蛋白纯化和去热源Antigenic Protein Purification and Depyrogenation
Cellufine™ Sulfate对病毒和其他微生物提取物除热原是一个理想的选择，因为它不结合内毒素。 图4显示了从百日咳鲍氏杆菌中纯化丝状血凝素(FHA)。
- 层析柱
- 16 x 70 mm (20 ml)
- 样品
- 800 ml百日咳博德特氏菌培养液
（通过鲎裂解物测试，内毒素滴度 > 1015） - 缓冲液
- 0.01M 磷酸盐 (pH 7.6)
- 洗脱液
- 1M NaCl/0.01M 磷酸盐 (pH 7.6)
- FHA产率
- 94%
- 纯化因子
- 20x
- 浓度系数
- 28x (30 ml product)
- 内毒素
- 经鲎试剂、家兔热原和小鼠毒性试验，均低于标准水平。
蛋白质纯化Protein Purification
Cellufine™ Sulfate模仿肝素或硫酸葡聚糖对许多蛋白质的亲和力。它可以作为一种亲和力 结合特定的血浆蛋白，细胞生长因子和脂肪酶， 其容量可与传统的肝素凝胶相媲美。
| 结合蛋白 | 非结合蛋白 |
|---|---|
|
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| *结合和洗脱非常迅速，并且可以在梯度模式下产生非常精细的分离 | |
Table 4
从小牛胸腺中纯化部分纯化的酪蛋白激酶IIPurification of Partially Purified Casein Kinase II from Calf Thymus
- 层析柱
- 10 x 20 mm
- 样品
- 7 ml
- 缓冲液
- 50mM Tris-HCl (pH 7.9)
+ 50mM MgCl2
+ 0.1mM EDTA
+ 0.1mM PMS
+ 0.5mM DTT
+ 25 % glycerol - 洗脱液
- 0.05 – 1.0M NaCl缓冲液
- CellufineTMSulfate
