Cellufine™ Phosphate HC
用于纯化作为mRNA药物合成酶的T7 RNA聚合酶等核酸结合蛋白
Cellufine™ Phosphate HC是一种用于纯化蛋白激酶、限制性内切酶、核酸酶、聚合酶等核酸相关蛋白的亲和色谱填料。其通过在球状纤维素颗粒上固定化磷酸酯基。
与传统Cellufine™ Phosphate相比，通过控制孔径尺寸，提高了分子量45 kDa以上的大分子蛋白的吸附量。
特别适用于T7 RNA聚合酶等大分子酶的纯化。
| Cellufine™ Phosphate | Cellufine™ Phosphate HC | |
|---|---|---|
| 配基 | 磷酸酯基 | 磷酸酯基 |
| 基体载体 | 纤维素颗粒 | |
| 粒径（μm） | 40 - 130 | |
| 排阻极限分子量（kDa） | 30〜40 | 150 |
| 离子交换容量（meq/mL-gel） | 0.3 - 0.8 | 0.2 - 0.8 |
| 溶菌酶吸附量（mg/mL-gel） | 140 | - |
| IgG吸附量（mg/mL-gel） | - | 100 |
| 推荐操作压力（MPa） | < 0.2 | |
| pH稳定性 | 5 - 12 | |
| 保存方法 | 2–8 ℃ in 20 % ethanol | |
Cellufine™ Phosphate HC的吸附性能Adsorption Performance
采用模型蛋白，对Cellufine™ Phosphate HC与Cellufine™ Phosphate的蛋白吸附量进行比较。
Cellufine™ Phosphate对溶菌酶等分子量较小的蛋白具有较高的吸附容量，这是由于其孔径尺寸更适合小分子蛋白。
另一方面，Cellufine™ Phosphate HC对于45 kDa以上蛋白具有极高的吸附能力。尤其对于在mRNA药物合成中备受关注的T7RNAP，其吸附能力是传统产品的9倍。
因此，这两种Phosphate填料可根据蛋白分子量进行区分使用。
焦磷酸酶与牛痘病毒加帽酶的纯化Purification of pyrophosphatase and vaccinia capping enzymes
Cellufine™ Phosphate HC不仅对T7RNAP，对例如焦磷酸酶和牛痘病毒加帽酶也表现出强亲和活性。在10 mM磷酸缓冲液（pH7）条件下，将焦磷酸酶吸附于色谱柱后，通过梯度增加NaCl浓度，并测定其洗脱时的电导率（Figure 3）。
焦磷酸酶洗脱峰对应电导率为74.5 mS/cm（相当于0.9 M NaCl），显示出强吸附性。而牛痘病毒加帽酶在50 mS/cm时出现最大洗脱峰（Figure 4）。
在此类盐浓度下，通过静电相互作用吸附的杂质蛋白不会残留在柱中，因此可高效纯化具有亲和活性的酶类。
T7 RNA聚合酶的纯化案例
使用Cellufine™ Phosphate HC与阴离子交换色谱填料Cellufine™ MAX DEAE，对T7RNAP进行高纯度纯化的案例。
如Figure 5所示，T7RNAP在经过裂解与硫酸铵沉淀等前处理后，通过Cellufine™ MAX DEAE及Cellufine™ Phosphate HC可实现高纯度纯化。
| 纯化步骤 | 酶活性 (U) |
蛋白质 (ng/Unit) |
DNA (pg/Unit) |
|---|---|---|---|
| 上样样品 | - | 5.27 | 1.14 |
| Cellufine™ Phosphate | 626,816 | 1.53 | 0.58 |
| Cellufine™ Phosphate HC | 603,621 | 1.69 | 0.49 |
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