亲和色谱填料用于去除内毒素

CellufineTMET clean

介绍

  Cellufine™ ET clean是一款把聚(ε-赖氨酸)為配基固定在繊維素基球上的層析填料。 這種填料可選択性的結合様品中混入的内毒素並将其去除。 配基(聚ε-赖氨酸)来源於放線菌(Streptomyces albulus)生産的25-35个赖氨酸聚合物。

  Cellufine™ ET clean内毒素去除填料是由熊本大学和Chisso株式会社共同开发的。聚赖氨酸被固定在氯甲基环氧乙烷活化的纤维素基球上, 其在用0.2 M NaOH和2 M NaCl的清洗液洗浄後依然保持非常安定的親和活性。

  Cellufine™ ET clean可在生理pH下从细胞产物溶液中去除内毒素,离子强度μ= 0.02-1.0,0°-25C°

Cellufine ET clean S的电子显微镜照片
Cellufine™ ET clean-S 微球的电镜照片。

部分结构

Cellufine ET clean S的配体结构

特征

名称 保存 粒径 孔径*
Cellufine™ ET clean S 14%乙醇悬浮液 ca. 40-130 μm Mlim 2000
Cellufine™ ET clean L 14%乙醇悬浮液 ca. 40-130 μm >Mlim 2x106

*球的孔径(分子量排阻;M lim)是根据通过尺寸排阻色谱法获得的校准曲线估算的。支链淀粉和麦芽糖用于M lim测定。

通过Cellufine ET clean从牛血清白蛋白(BSA)溶液中选择性吸附内毒素(LPS)

使用Cellufine ETclean 去除蛋白质中的内毒素

  使用0.2g湿樹脂和2ml样品溶液用批次法测定内毒素的特异性吸附(BSA:500μg/ ml,大肠杆菌O111:B4 LPS:100ng / ml,pH7.0,离子强度μ= 0.05-0.8)。

通过Cellufine™ ET clean樹脂从蛋白质溶液中特异性去除内毒素

样品溶液 Cellufine™ ET clean S Cellufine™ ET clean L
样品名称(pI) 处理前内毒素浓度(pg/ml) (μ = 0.05, pH 7.0) (μ = 0.4, pH 7.0)
处理后内毒素浓度(pg/ml) 蛋白质回收(%) 处理后内毒素浓度(pg/ml) 蛋白质回收(%)
卵清蛋白(4.6) 28,000 81 99 <10 95
牛血清白蛋白(4.9) 32,000 45 99 <10 97
肌红蛋白(6.8) 4,500 18 99 <10 98
丙种球蛋白(7.4) 5,600 20 99 <10 97
细胞色素C(10.6) 1,500 15 99 <10 98

 通过批次法用0.3ml湿樹脂(ET clean)和2ml含有天然内毒素的蛋白质溶液(1mg / ml)测定内毒素的去除。

应用数据

ET 去除Exp。
BSA / ETclean L

柱层析

柱尺寸
1 X 1.1 cm (I.D.) (1.1ml)
流速
0.17 ml / min (10cm / h)
缓冲液
50 mM PB, pH 7 + 0.15 mol NaCl水溶液

測定

- 280nm蛋白测定
- ET LAL法内毒素测定

- 注射样品 (150 ml)
- BSA 1 mg/ml ET 100 EU/ml

使用Cellufine ET clean L去除BSA中的内毒素
Removal of the endotoxin from Albumin.

溶菌酶 / ETclean L

柱层析

柱尺寸
10 x 0.9 cm (I.D.) (9.6 ml)
流速
0.5 ml / min (47 cm / h)
缓冲液
1 mM Tris-HCl, pH 7.3
梯度洗脱液
0 → 1.0 mol / l NaCl aq.

測定

- 280nm蛋白测定
- ET LAL法内毒素测定

注射样品 (1ml)
14 mg / ml
使用Cellufine ET clean L去除卵白溶菌酶中的内毒素
Removal of the endotoxin from Lysozyme.

胰岛素A链 / ETclean-L

注射样品 (1ml)
13 mg / ml, 309 EU / ml
使用Cellufine ET clean L去除胰岛素α链中的内毒素

转铁蛋白 / ETclean L

注射样品 (1ml)
13 mg / ml, 2982 EU / ml
使用Cellufine ET clean L去除转铁蛋白中的内毒素

参考

1) M. Sakata, M. Todokoro, C. Hirayama, American Biotechnol. Lab., 20 (2002) 36.
2) M. Todokoro, M. Sakata, S. Matama, M. Kunitake, J. Ohkuma, C. Hirayama, J. Liq. Chrom. & Rel. Technol., 25 (2002) 601.

Cellufine™ ET clean内毒素去除樹脂由熊本大学和Chisso公司共同开发

特殊定制

可根据客户需求承接特定填料的可开(商談)

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