CellufineTMET clean
介绍
Cellufine™ ET clean是一款把聚（ε-赖氨酸）為配基固定在繊維素基球上的層析填料。 這種填料可選択性的結合様品中混入的内毒素並将其去除。 配基（聚ε-赖氨酸）来源於放線菌（Streptomyces albulus）生産的25-35个赖氨酸聚合物。
Cellufine™ ET clean内毒素去除填料是由熊本大学和Chisso株式会社共同开发的。聚赖氨酸被固定在氯甲基环氧乙烷活化的纤维素基球上， 其在用0.2 M NaOH和2 M NaCl的清洗液洗浄後依然保持非常安定的親和活性。
Cellufine™ ET clean可在生理pH下从细胞产物溶液中去除内毒素，离子强度μ= 0.02-1.0，0°-25C°
部分结构
特征
| 名称 | 保存 | 粒径 | 孔径* |
|---|---|---|---|
| Cellufine™ ET clean S | 14%乙醇悬浮液 | ca. 40-130 μm | Mlim 2000 |
| Cellufine™ ET clean L | 14%乙醇悬浮液 | ca. 40-130 μm | >Mlim 2x106 |
*球的孔径（分子量排阻；M lim）是根据通过尺寸排阻色谱法获得的校准曲线估算的。支链淀粉和麦芽糖用于M lim测定。
通过Cellufine ET clean从牛血清白蛋白（BSA）溶液中选择性吸附内毒素（LPS）
使用0.2g湿樹脂和2ml样品溶液用批次法测定内毒素的特异性吸附（BSA：500μg/ ml，大肠杆菌O111：B4 LPS：100ng / ml，pH7.0，离子强度μ= 0.05-0.8）。
通过Cellufine™ ET clean樹脂从蛋白质溶液中特异性去除内毒素
| 样品溶液 | Cellufine™ ET clean S | Cellufine™ ET clean L | |||
|---|---|---|---|---|---|
| 样品名称(pI) | 处理前内毒素浓度(pg/ml) | (0.02M PB, pH7.0, μ=0.05) | (0.02M PB + 0.36M NaCl, pH7.0, μ=0.40) | ||
| 处理后内毒素浓度(pg/ml) | 蛋白质回收(%) | 处理后内毒素浓度(pg/ml) | 蛋白质回收(%) | ||
| 卵清蛋白(4.6) | 28,000 | 81 | 99 | <10 | 95 |
| 牛血清白蛋白(4.9) | 32,000 | 45 | 99 | <10 | 97 |
| 肌红蛋白(6.8) | 4,500 | 18 | 99 | <10 | 98 |
| 丙种球蛋白(7.4) | 5,600 | 20 | 99 | <10 | 97 |
| 细胞色素C(10.6) | 1,500 | 15 | 99 | <10 | 98 |
将 2 ml 蛋白质溶液（1 mg/ml，LPS：各种蛋白质试剂中的污染物）添加到 0.3 mL ET clean 中。1 个内毒素单位 (EU) = 250pg LPS 可以换算。
应用数据
ET 去除Exp。
BSA / ETclean L
柱层析
- 柱尺寸
- 1 X 1.1 cm (I.D.) (1.1ml)
- 流速
- 0.17 ml / min (10cm / h)
- 缓冲液
- 50 mM PB, pH 7 + 0.15 mol NaCl水溶液
測定
- 280nm蛋白测定
- ET LAL法内毒素测定
- 注射样品 (150 ml)
- BSA 1 mg/ml ET 100 EU/ml
溶菌酶 / ETclean L
柱层析
- 柱尺寸
- 10 x 0.9 cm (I.D.) (9.6 ml)
- 流速
- 0.5 ml / min (47 cm / h)
- 缓冲液
- 1 mM Tris-HCl, pH 7.3
- 梯度洗脱液
- 0 → 1.0 mol / l NaCl aq.
測定
- 280nm蛋白测定
- ET LAL法内毒素测定
- 注射样品 (1ml)
- 14 mg / ml
胰岛素A链 / ETclean-L
- 注射样品 (1ml)
- 13 mg / ml, 309 EU / ml
转铁蛋白 / ETclean L
- 注射样品 (1ml)
- 13 mg / ml, 2982 EU / ml
参考
1) M. Sakata, M. Todokoro, C. Hirayama, American Biotechnol. Lab., 20 (2002) 36.
2) M. Todokoro, M. Sakata, S. Matama, M. Kunitake, J. Ohkuma, C. Hirayama, J. Liq. Chrom. & Rel. Technol., 25 (2002) 601.
Cellufine™ ET clean内毒素去除樹脂由熊本大学和Chisso公司共同开发
- Cellufine ET clean S
- Cellufine ET clean L
