用于抗体纯化的蛋白A亲和填料
Cellufine™ SPA-HC

  蛋白A介质往往用于抗体制药的第一步纯化。 在该步骤中,需要在短时间内将大量培养上清液中的抗体进行富集纯化。下面描述的高性能蛋白A介质将是非常好的一个选择。

1. 高流速下具有高动态结合能力
2. 高流速时的低背压
3. 优异的重复使用寿命

  Cellufine™ SPA-HC 填料的配基为耐碱蛋白A。為了大分子抗体利於通過,利用基球的交联技术這款填料具備低背压和很高的大孔径分布率。
  通过40多年的色谱行业经验获得的独特纤维素微球制造技术,该技术使填料在高流速下依然可以实现高动态结合能力。
Cellufine SPA-HC的开发可用于生产规模。 因此,在您现有的设备基础上可以大幅缩短纯化时间。

Cellufine™SPA-HC的特性
名称 特征
配体 大肠杆菌表达生产的亲和配体耐碱蛋白 A
基质 高度交联的纤维素微球
粒径 平均直径70μm
配体偶联方法 甲酰基偶联
流速 ≥650cm/ h(0.3MPa),10cmID×20cmL,24℃
动态结合載量(DBC) ≧ ≥70mg/ ml(DBC C 10,多克隆免疫球蛋白G)1
CIP溶液 0.1 M NaOH
温度稳定性 4 - 50℃储存1周后性能无明显变化。
储存 2-8℃,14%(v / v)乙醇
化学稳定性 在30%(v / v)异丙醇,20-70%(v / v)乙醇,8M尿素,6M盐酸胍或0.1M醋酸下储存1周后性能无显着变化
pH工作范围 3-12

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Cellufine SPA-HC
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Cellufine SPA-HC的特点
  • 偶联配体为耐碱蛋白 A。
  • 由于其独特的交联技术使得填料具有高孔隙率、低背压,可以促进抗体与固定的亲和配体之间的结合。
  • 独特的微球制造技术,可生产在高流速下具有高动态结合能力的介质
  Cellufine SPA-HC在现有设备的基础上,可实现更高的分離純化能力和更短的制造工艺,从而可以加速抗体生物制剂的生产。

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出色的动态吸附載量
Cellufine SPA-HC纯化人mAb亚型1抗体显示出高动态載量(参见图1),数据表明该填料可有效的用于mAb纯化工艺。


图1:人pAb(输注用IgG)为商业购买。 人mAb IgG1为从CHO细胞培养物中纯化。

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高流速时低背压
  由于Cellufine SPA-HC是高度交联的纤维素微球结构, 非常适用于大规模色谱柱的层析纯化。 压力 - 流速研究表明在Cellufine SPA-HC 10cmID×20cmL(1.57L)柱中线速度650cm / h时产生的背压<0.6MPa。
 
  上述数据表明,Cellufine SPA HC填料在中试工艺层析柱中, 流速为650cm / h,背压<0.3MPa,样品柱保留时间为2.4min,可从澄清的CHO细胞样品中获得50mg / mL的mAb动态载量。


图2  压力/流量测试在10cmID×20cmL柱中进行

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对不同种类的单克隆抗体都具有优异的特异亲和力
  使用具有不同等电点(pI)和亚型的单克隆抗体用于研究分子电荷状态是否对填料的动态结合能力有影响。 结果表明,与85μM高容量琼脂糖填料相比,Cellufine SPA-HC可以吸附更广泛pI的抗体并显示出更高的DBC容量。如下图3所示。


图3 各种等电点的单克隆抗体纯化,包括人源化抗体。

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优异的重复使用寿命
  重复使用蛋白A亲和填料循环期间,使用碱液进行原位在线清洗(CIP)。 Cellufine SPA-HC经过0.1 M NaOH碱性CIP评估,可重复使用150次循环。 结果总结在下面的图4中。
  数据显示在150次0.1M NaOH CIP循环后DBC依然具有高保留率(> 95%)。 循环开始的容量为76 mg / mL,在研究结束时仅降低至72 mg / mL。


图4 用0.1M氢氧化钠进行原位在线清洗,保留时间15分钟

  该图显示剩余的动态结合載量作为比率,10%DBC第一次吸附量为76 mg / mL,经过150次循环碱洗再生,10%DBC吸附仅降低至72 mg / mL,研究结束后填料的动态结合能力仍然具有95%。

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