亲和色谱填料
Cellufine™ Sulfate

用于病毒、病毒/微生物抗原和肝素结合蛋白的浓缩、纯化以及去除内毒素。

  疫苗和临床诊断方面的进步已经产生了对大量高纯度和浓缩的病毒以及病毒或微生物抗原的日益增长的需求。 Cellufine Sulfate亲和填料是一种简单、快速、有效的浓缩、纯化和去除這些重要产品的热原。

  Cellufine Sulfate不仅可消除传统的超速离心沉降法和密度梯度方法的繁琐、耗时和潜在的不安全性,还能显著提高浓度和纯度。 Cellufine Sulfate可以减少或消除与固定化硫酸葡聚糖、硫酸软骨素或肝素有关的损耗、配体泄漏和重现性问题。

   通过离子强度的简单逐步或梯度增加来影响结合产物的洗脱。

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应用数据:使用Cellufine进行病毒和病毒样颗粒纯化(PDF)



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特征

 

► 对多种活病毒、灭活的或结构分裂的病毒、微生物抗原和肝素结合蛋白具有亲和力。

► 封闭柱操作确保安全性和产品无菌

► 内毒素不结合,可快速和无污染的去除热原

► 刚性,高强度微球

► 可高压灭菌



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优势

 

►比超速离心更有效去除培养基和宿主细胞中的污染物

► 避免过多的产品处理和安全问题,尤其是病毒制剂

► 同时浓缩和纯化可提高产量,减少加工步骤,时间和成本

► 温和的结合和洗脱条件提供高容量和产品产量

► 抗压缩,即使在大型色谱柱中也能为高速处理提供快速流动,使其易于放大

► 耐碱性化学除热原,可用福尔马林化学灭菌


Figure1

特点
基质 纤维素
粒径 ca. 40 – 130 µm
颗粒形状 球形
排阻极限 3kD
活化基团 硫酸酯
总硫 >700 µg/g dry
蛋白
 溶菌酶 :
 乙型肝炎表面抗原 :

>3 mg/ml
7 mg/ml
环境耐受性 耐0.1M NaOH,含有0.1%的37%福尔马林
工作压力 <2 bar (30 psi)
高温高压灭菌 在中性pH下悬浮; 121°C 30分钟
存储 14%的乙醇悬浮液


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流动特性

Figure2
The nearly rigid properties 球形纤维素基质的良好刚性特性使其拥有出色的流动性,
特别是在大型生产柱中

层析柱 A: 90 x 200 mm
层析柱 B: 350 x 200 mm


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病毒,病毒/微生物抗原

病毒 病毒/微生物制剂
• 狂犬病*
• 流感*
• 日本脑炎*
• 猫白血病
• 猫疱疹
• 猫杯状病毒
• 呼吸多核体病毒
• 人类单纯疱疹
• 人类麻疹
• 人类副流感病毒
• 单纯疱疹病毒gA和gB糖蛋白亚基*
• 乙型肝炎表面抗原
• 百日咳博德特氏菌丝状血凝素
• 白细胞增多促进因子血凝素
*这些应用案例由美国和海外专利提供。
请查询有关详情和经营许可。
Table1


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狂犬病病毒纯化

 

  图3中的示例说明了用Cellufine Sulfate在传统的病毒制剂上获得的高度濃縮、纯化和収率。


Figure3
层析柱 : 50 x 70 mm (140 ml)
缓冲液 : 0.01M磷酸盐(pH 7.2)
洗脱 : 1M NaCl/0.01M磷酸盐(pH 7.2)

  上样 洗脱
体积 (ml) 4,200 50
病毒滴度 32 4,096
蛋白质 (µg/ml) 8.5 14
收率 (%) 100 152
纯化因子   79x
浓度系数   126x
Table2


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流感病毒纯化

 

  将鸡蛋尿囊液直接加载到33.3 mL凝胶柱床上,在洗脱液中回收了94.5%的病毒


  体积
(ml)
病毒滴度
Titer
TCA-N
µg/ml
收率
(%)
纯化倍数
Purification
尿囊液 4200 77 337.1 100 1
洗涤 6700 1 209.2 2.1 -
洗脱 170 1797 448.0 94.5 20.1
Table3
层析柱 : 50 x 170 mm
缓冲液 : 0.01M 磷酸盐 pH 7.4
洗涤 : 0.01M 磷酸盐 pH 7.2 + 0.2M 氯化钠
洗脱 : 0.01M 磷酸盐 pH 7.0 + 1.5M 氯化钠


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抗原蛋白纯化和去热源

 

  Cellufine Sulfate对病毒和其他微生物提取物除热原是一个理想的选择,因为它不结合内毒素。 图4显示了从百日咳鲍氏杆菌中纯化丝状血凝素(FHA)。


Figure4
层析柱 : 16 x 70 mm (20 ml)
样品 : 800 ml百日咳博德特氏菌培养液
(通过鲎裂解物测试,内毒素滴度 > 1015)
缓冲液 : 0.01M 磷酸盐 (pH 7.6)
洗脱液 : 1M NaCl/0.01M 磷酸盐 (pH 7.6)
FHA产率 : 94%
纯化因子 : 20x
浓度系数 : 28x (30 ml 产品)
内毒素 : 经鲎试剂、家兔热原和小鼠毒性试验,均低于标准水平。


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蛋白质纯化

 

  Cellufine Sulfate模仿肝素或硫酸葡聚糖对许多蛋白质的亲和力。它可以作为一种亲和力 结合特定的血浆蛋白,细胞生长因子和脂肪酶, 其容量可与传统的肝素凝胶相媲美。


结合蛋白 非结合蛋白
• 抗凝血酶III
• β-脂蛋白
• 补体 C5, C6, C8
• 补体 C3  激活剂
• 胰蛋白酶
• 胰蛋白酶抑制剂
• 胰凝乳蛋白酶原
• 溶菌酶
• 脲酶
• 过氧化氢酶
• 因子 IX
• 白蛋白
• α-脂蛋白
• 补 C3, C9
• 补充C1, C3b失活剂
• 免疫球蛋白G
• 血浆铜蓝蛋白
• α2-巨球蛋白
• 核糖核酸酶
• 杆菌肽
• 葡萄糖氧化酶
*结合和洗脱非常迅速,并且可以在梯度模式下产生非常精细的分离
Table4


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从小牛胸腺中纯化部分纯化的酪蛋白激酶II

Figure5
层析柱 : 10 x 20 mm
样品 : 7 ml
缓冲液 : 50mM Tris-HCl (pH 7.9)
+ 50mM MgCl2
+ 0.1mM EDTA
+ 0.1mM PMS
+ 0.5mM DTT
+ 25 % glycerol
洗脱液 : 0.05 – 1.0M NaCl缓冲液

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