亲和層析填料
Cellufine™ MAX DexS-HbP, DexS-VirS

  Cellufine MAX DexS是通過葡聚糖硫酸酯表面修飾的一款新型層析填料。 可以使用这种非动物来源的配基代替固定化的肝素进行血液蛋白和病毒的分离純化。

   JNC提供両款不同的MAX DexS填料,其主要区别是樹脂表面被修飾的配基采用了不同长度的硫酸葡聚糖聚合物。 a)DexS-HbP適用于肝素結合蛋白的純化。b) DexS-VirS尤其適用于与肝素有親和性的病毒和病毒様顆粒(VLP)的純化。 已被开发的這两款填料,通过在樹脂表面交聯上拟有亲和力的硫酸葡聚糖聚合物来提高现有树脂的蛋白质或病毒捕获效率。 交联纤维素基球通过最优化設計可适用于高流量应用,並可在0.5M氢氧化钠的条件下完全適用於樹脂的在位清洗(CIP)。 填料性能概述见下表1。

性能特点
产品名称 Cellufine MAX DexS-HbP Cellufine MAX DexS-VirS
配基 硫酸葡聚糖
基质 交联纤维素颗粒
粒径 40 -130 μm (ca 90μm)
硫含量 ≥ 36 μmol/mL ≥ 74 μmol/mL
溶菌酶吸附載量 ≥ 50 mg/mL ≥ 56 mg/mL
pH稳定性 3 - 12
工作压力 < 0.3 MPa
Figure1

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  Cellufine MAX DexS-HbP是用低分子量硫酸葡聚糖修饰和模拟了一个有亲和力的配基。 可以使用这种非动物来源的亲和配基代替固定化的肝素进行血液蛋白的分离纯化。 交联纤维素基球通过最优化設計可适用于高流量应用,並可在0.5M NaOH的条件下完全適用於樹脂的在位清洗(CIP)。 开发这种新树脂是為了提高从血浆中纯化肝素结合蛋白的捕获率,如乳铁蛋白(下图1)和抗凝血酶III。

Figure1


Cellufine MAX DexS-VirS纯化灭活的流感病毒 

  硫酸葡聚糖交联的琼脂糖亲和填料已用于从尿囊和细胞培养样品中捕获并纯化高纯度的灭活流感病毒。

   捕获灭活的流感病毒(A / duck / Hokkaido / Vac-2/2007 H7N7)并在纯化洗脱流程中测量10%DBC。 如下,该研究使用色谱柱(5mmID×2.5cmL,0.49mL体积)在10mM磷酸钠,120mM NaCl缓冲液pH 7.4中以0.2mL / min的流速(60cm / h,停留时间为2.5min)进行。 通过测量分级收集的HA病毒活性来计算病毒吸附容量。 结果总结在图2、3和表2中。 与其他硫酸葡聚糖修饰的树脂和硫酸纤维素相比(Cellufine sulfate),Cellufine MAX DexS-VirS显示出优异的病毒吸附能力。



填料 : Cellufine MAX DexS-VirS
层析柱 : I.D. 5.0 x 25 mmH (0.5 ml)
样品 : 灭活的流感病毒尿囊液
病毒类型 : A/duck/Hokkaido/Vac-2/2007(H7N7)
流速 : 0.2 ml/min(60 cm/hr, R.T. 2.5 min)
平衡液 : 10 mM 磷酸钠, 120 mM 氯化钠, pH 7.4
洗涤液 : 10 mM 磷酸钠, 150 mM 氯化钠, pH 7.4
洗脱液 1 : 10 mM 磷酸钠, 500 mM 氯化钠, pH 7.4
洗脱液 2 : 10 mM 磷酸钠, 2 M 氯化钠, pH 7.4


步骤 HA 总蛋白质 DNA
HAU % mg % ng/HAU mg % pg/HAU
上样量 204,800 100 6.4 100 31.3 24.7 100 120.6
流穿 7,760 3.8 4.1 64.2 530.7
洗脱 1 139,520 68.1 0.4 5.9 2.7 3.0 12.0 21.3
洗脱 2 64,160 31.3 0.1 1.5 1.5 3.4 13.9 53
总回收率 211,440 103.2 4.6 71.6 21.7
Figure1


Figure5

I.D. 5.0 x 25 mmH (0.5 ml)
灭活的流感病毒尿囊液
A/duck/Hokkaido/Vac-2/2007(H7N7)
0.2 ml/min(60 cm/hr, R.T. 2.5 min)
10 mM 磷酸钠, 120 mM 氯化钠, pH 7.4


Resin 10% DBC
HAU/ml-resin

Cellufine MAX DexS-VirS 348,160 (100)

Cellufine Sulfate 225,280 (64)

硫酸葡聚糖修饰琼脂糖填料 286,720 (82)



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