亲和色谱填料用于去除内毒素
Cellufine™ ET clean

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介绍

 

  Cellufine™ ET clean是一款把聚(ε-赖氨酸)為配基固定在繊維素基球上的層析填料。 這種填料可選択性的結合様品中混入的内毒素並将其去除。 配基(聚ε-赖氨酸)来源於放線菌(Streptomyces albulus)生産的25-35个赖氨酸聚合物。


  Cellufine™ ET clean内毒素去除填料是由熊本大学和Chisso株式会社共同开发的。聚赖氨酸被固定在氯甲基环氧乙烷活化的纤维素基球上, 其在用0.2 M NaOH和2 M NaCl的清洗液洗浄後依然保持非常安定的親和活性。

  Cellufine™ ET clean可在生理pH下从细胞产物溶液中去除内毒素,离子强度μ= 0.02-1.0,0°-25C°
Electron micrograph of Cellufine(TM) ETclean-S beads.
  Cellufine™ ET clean-S
微球的电镜照片。


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部分结构
Partial Structure


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特征

名称 保存 粒径 孔径*
Cellufine™ ETclean-S 14%乙醇悬浮液 ca. 40-130 μm Mlim 2000
Cellufine™ ETclean-L 14%乙醇悬浮液 ca. 40-130 μm >Mlim 2x106

*球的孔径(分子量排阻;M lim)是根据通过尺寸排阻色谱法获得的校准曲线估算的。支链淀粉和麦芽糖用于M lim测定。


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通过Cellufine ET clean从牛血清白蛋白(BSA)溶液中选择性吸附内毒素(LPS)

ETclean

  使用0.2g湿樹脂和2ml样品溶液用批次法测定内毒素的特异性吸附(BSA:500μg/ ml,大肠杆菌O111:B4 LPS:100ng / ml,pH7.0,离子强度μ= 0.05-0.8)。


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通过Cellufine™ ET clean樹脂从蛋白质溶液中特异性去除内毒素

样品溶液 Cellufine™ ETclean-S Cellufine™ ETclean-L

样品名称

pI

处理前内毒素浓度
(pg/ml)
(μ = 0.05, pH 7.0) (μ = 0.05, pH 7.0)
处理后内毒素浓度(pg/ml) 蛋白质回收(%) 处理后内毒素浓度(pg/ml) 蛋白质回收(%)
卵清蛋白 4.6
28,000 81 99 <10 95
牛血清白蛋白 4.9
32,000 45 99 <10 97
肌红蛋白 6.8
4,500 18 99 <10 98
丙种球蛋白 7.4
5,600 20 99 <10 97
细胞色素C 10.6
1,500 15 99 <10 98

  通过批次法用0.3ml湿樹脂(ET clean)和2ml含有天然内毒素的蛋白质溶液(1mg / ml)测定内毒素的去除。


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应用数据

ET 去除Exp。
BSA / ETclean L
柱层析
- 柱尺寸 : 1 X 1.1 cm (I.D.) (1.1ml)
- 流速 0.17 ml / min (10cm / h)
- 缓冲液 50 mM PB, pH 7 + 0.15 mol NaCl水溶液
測定
- 280nm蛋白测定
- ET LAL法内毒素测定
 
- 注射样品 (150 ml)
- BSA 1 mg/ml ET 100 EU/ml

Application Data

溶菌酶 / ETclean L
柱层析
- 柱尺寸 10 x 0.9 cm (I.D.) (9.6 ml)
- 流速 0.5 ml / min (47 cm / h)
- 缓冲液 1 mM Tris-HCl, pH 7.3
- 梯度洗脱液 0 → 1.0 mol / l NaCl aq.
測定
- 280nm蛋白测定
- ET LAL法内毒素测定
 
- 注射样品 (1ml) : 14 mg / ml

Application Data

胰岛素A链 / ETclean-L
- 注射样品 (1ml) : 13 mg / ml, 309 EU / ml

Application Data

转铁蛋白 / ETclean L
- 注射样品 (1ml) : 13 mg / ml, 2982 EU / ml

Application Data


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参考

 

1) M. Sakata, M. Todokoro, C. Hirayama, American Biotechnol. Lab., 20 (2002) 36.
2) M. Todokoro, M. Sakata, S. Matama, M. Kunitake, J. Ohkuma, C. Hirayama, J. Liq. Chrom. & Rel. Technol., 25 (2002) 601.

 

Cellufine™ ET clean内毒素去除樹脂由熊本大学和Chisso公司共同开发


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